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伯樂t100pcr儀 擴(kuò)增反應(yīng)的步驟
更新時(shí)間：2023-05-11   點(diǎn)擊次數(shù)：1020次
PCR(Polymerase Chain Reaction)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)。通過變性、退火、延伸等步驟,體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。
 
經(jīng)典的PCR擴(kuò)增反應(yīng)分為三步：

1、高溫變性：模板DNA經(jīng)加熱至95℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；

2、低溫退火：模板DNA與引物的復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；

3、適溫延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以核苷酸為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
 

影響擴(kuò)增的因素：

1、由于各種原因，造成的PCR擴(kuò)增體系中出現(xiàn)了非目的檢測(cè)樣本本身的模板，使得PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽性

2、操作錯(cuò)誤或者誤差造成的模板間交叉污染

3、PCR試劑的污染

4、PCR實(shí)驗(yàn)器材的污染

5、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠污染

1 (7).jpg

防止污染的首要原則是要設(shè)置NTC(No Template Contro|)對(duì)照，一個(gè)不含有模板DNA但含有PCR體系中所有其他成分的對(duì)照。如果不能在污染的第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)一系列的數(shù)據(jù)無法使用。準(zhǔn)備PCR體系的移液器要，千萬不能用吸取過PCR產(chǎn)物的移液器去準(zhǔn)備PCR體系。

技術(shù)參數(shù)及配置要求

1 工作環(huán)境
1.1 工作溫度 15-31℃
1.2 工作和存儲(chǔ)濕度 20-80%
1.3 工作電源 100–240 VAC (±10%), 50–60HZ.
2 用途
用于體外核酸片段擴(kuò)增,具有溫度梯度功能。
3 性能與技術(shù)要求（*為必須滿足的指標(biāo)）
3.1 主要性能
3.1.1 有5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏，實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)時(shí)顯示溫控及運(yùn)行狀態(tài)
3.1.2 用戶可設(shè)置休眠模式使其更節(jié)電
3.2 主要技術(shù)指標(biāo)（*為必須滿足的指標(biāo)）
* 3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)模板：96-well 0.2 ml 反應(yīng)板或96個(gè)0.2ml PCR管
*3.2.2 最大升降溫速率：4℃/秒
* 3.2.3 溫度梯度：同時(shí)運(yùn)行8個(gè)不同溫度；溫度梯度范圍：30 - 100℃；溫差范圍：1 - 25℃
*3.2.4 溫度范圍：4-100℃
*3.2.5 5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏，文字及溫度曲線全信息動(dòng)態(tài)顯示，保證實(shí)時(shí)控制實(shí)驗(yàn)過程
3.2.6 可存儲(chǔ)500個(gè)用戶程序
3.2.7 接口：1個(gè)USB



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